PH1417-1 | 1mL

 

試劑組分 

試劑(A): Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)----1ml----Store at -20℃

 

試劑(B): Nuclease-Free Water----5ml----Store at RT

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介 

DNA寡核苷酸退火緩沖液(Annealing Buffer for DNA Oligos)簡(jiǎn)稱為DNA退火緩沖液，是一種可用于DNA oligo退火的緩沖液，可用于常規(guī)的DNA oligo的退火，尤其適合于較難退火的用于RNAi (也稱siRNA)質(zhì)粒構(gòu)建的DNA oligo的退火。

 

Phygene的 Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)能有效避免DNA oligo自身形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，并且兩條oligo退火后可以直接和經(jīng)酶切、純化的質(zhì)粒連接，轉(zhuǎn)化后可以得到大量的陽(yáng)性克隆。該本試劑操作簡(jiǎn)單，只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)按照一定比例混合后，置于PCR儀上進(jìn)行程序降溫，約90min即可完成。

 

使用說明 

操作步驟(僅供參考)：  

 

1、 把待退火的DNA oligo用經(jīng)滅菌的超純水或Nuclease-Free Water配制成50μM， 同時(shí)溶解Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)，混勻備用。  

 

2、 按如下退火反應(yīng)體系操作：

 

Nuclease-Free Water----40μl

 

Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)----20μl

 

DNA oligo A(50μM)----20μl

 

DNA oligo B(50μM)----20μl

 

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Tatal 100μl

 

按照上述順序，依次加入并混勻，如果所用PCR儀沒有加熱蓋，可加入Mineral Oil防止 液體揮發(fā)。  

 

3、 按如下PCR儀的退火條件：

 

步驟 溫度 時(shí)間 作用

1 95℃ 2min Oligo充分變性

2 每90s下降1℃,降至25℃ 約90min 程序退火

3 4℃ 長(zhǎng)期保存 暫時(shí)存放

 注1：如果所用的PCR儀不具備下降0.1℃的功能，也可以設(shè)置為每90秒下降1℃。 

 

4、退火后可直接用于連接反應(yīng)，也可以-20℃凍存?zhèn)溆谩Ｈ绻嘶鸾Y(jié)束后打算進(jìn)行酶切等其它反應(yīng)，最好用純化試劑盒進(jìn)行純化，或者確保退火產(chǎn)物在反應(yīng)體系中體積不超過5%，以避免Annealing Buffer對(duì)后續(xù)的酶反應(yīng)體系的干擾。

 

注意事項(xiàng) 

1、 避免反復(fù)凍融，以免效率下降。  

 

2、 該試劑只適合于DNA oligo的退火，不適用于RNA oligo 的退火。

 

3、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

*important Note: This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.